? ? 分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。

????分光光度法又叫分光測色儀，它是通過樣品反射(透射)的光能量與同樣條件下標(biāo)準(zhǔn)反射(透射)的光能量進(jìn)行比較得到樣品在每個波長下的光譜反射率，然后利用CIE提供的標(biāo)準(zhǔn)觀察者和標(biāo)準(zhǔn)光源按如下公式計(jì)算，從而得到三刺激值X、Y、Z，再由X、Y、Z按CIEYxy，CIELab等公式計(jì)算色品坐標(biāo)x．y，CIELAB色度參數(shù)等。??
? ??分光測色儀通過探測樣品的光譜成分確定其顏色參數(shù)，不僅可以給出X、Y、Z的絕對值和色差值△E，還可以給出物體的分光反射率值，并可以畫出物體色的分光反射率曲線。因此被廣泛用于顏色的配色及色彩分析中去，采用此類儀器可實(shí)現(xiàn)高準(zhǔn)確度的色測量，可對光電積分測色儀器進(jìn)行定標(biāo)，建立色度標(biāo)準(zhǔn)等，這類儀器國內(nèi)較早研發(fā)的是廣州保來發(fā)的ST-700d系類的便攜式分光測色儀。故分光測色儀是顏色測量中優(yōu)選的儀器。

便攜式分光測色儀ST-700d是3nh運(yùn)用自主分光核心技術(shù)研發(fā)的陣列分光測色儀，采用內(nèi)置大面積硅光電二極管陣列（雙列40組）感應(yīng)器和工業(yè)級MCU，強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理能力保障了測量數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。陣列分光測色儀ST-700d重復(fù)性ΔE*ab 輕松控制在0.022以內(nèi)，臺間差ΔE*ab 控制在0.2以內(nèi)，可用于各種場合條件下的精確色彩測量，大尺寸觸摸屏查看測量結(jié)果更方便，儀器測量數(shù)據(jù)與日本、美國、歐洲等其它競品具有一致性。

波長范圍

(1)200～400nm的紫外光區(qū)，(2)400～760nm的可見光區(qū)， (3)2.5～25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>～400cm<-1>)的紅外光區(qū)。

基本原理

當(dāng)一束強(qiáng)度為I0的單色光垂直照射某物質(zhì)的溶液后，由于一部分光被體系吸收，因此透射光的強(qiáng)度降至I,則溶液的透光率T為:

根據(jù)朗伯(Lambert)-比爾(Beer)定律:

式中A為吸光度，b為溶液層厚度（cm），c為溶液的濃度（)， a為吸光系數(shù)。其中吸光系數(shù) 與溶液的本性、溫度以及波長等因素有關(guān)。溶液中其他組分（如溶劑等）對光的吸收可用空白液扣除。

由上式可知，當(dāng)固定溶液層厚度l和吸光系數(shù)a時，吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。在定量分析時，首先需要測定溶液對不同波長光的吸收情況（吸收光譜），從中確定最大吸收波長，然后以此波長 的光為光源，測定一系列已知濃度c溶液的吸光度A，作出A~c工作曲線。在分析未知溶液時，根據(jù)測量的吸光度A，查工作曲線即可確定出相應(yīng)的濃度。這便是分光光度法測量濃度的基本原理。

主要特點(diǎn)

分光光度法對于分析人員來說，可以說是最有用的工具之一。幾乎每一個分析實(shí)驗(yàn)室都離不 開紫外可見分光光度計(jì)。分光光度法的主要特點(diǎn)為：

（1）應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收，因此均可借此法加以測定。到目前為止，幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素（除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外）均可采用此法。在國際上發(fā)表的有關(guān)分析的論文總數(shù)中，光度法約占28%，我國約占所發(fā)表論文總數(shù)的33% 。

（2）靈敏度高

由于新的顯色劑的大量合成，并在應(yīng)用研究方面取得了可喜的進(jìn)展，使得對元素測定的靈敏 度有所推進(jìn)，特別是有關(guān)多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究，使許多元素的摩爾吸光 系數(shù)由原來的幾萬提高到數(shù)十萬。

（3）選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定，如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定，已有比較滿意的方法了。

（4）準(zhǔn)確度高

對于一般的分光光度法，其濃度測量的相對誤差在1～3%范圍內(nèi)，如采用示差分光光度法進(jìn) 行測量，則誤差可減少到0.X%。

（5）適用濃度范圍廣

可從常量（1%～50%）（尤其使用示差法）到痕量（10-8～10-6%）（經(jīng)預(yù)富集后）。

（6）分析成本低、操作簡便、快速

由于分光光度法具有以上優(yōu)點(diǎn)，因此目前仍廣泛地應(yīng)用于化工、冶金、地質(zhì)、醫(yī)學(xué)、食品、制藥等部門及環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)。單在水質(zhì)分析中的應(yīng)用就很廣，目前能有直接法和間接法測定的金屬和非金屬元素就有70多種。

主要種類

原子吸收分光光度法

紫外分光光度法

雙波長分光光度法

納氏試劑分光光度法

鉬銻抗分光光度法

亞甲基藍(lán)分光光度法

鄰菲羅啉分光光度法

熒光分光光度法

使用范圍簡介

凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。

測定方法

對照品比較法

（1）按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分標(biāo)示量的100±10%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算含量，即得。

（2）計(jì)算式

含量（%）= ————————————-- ×100%

吸收系數(shù)法

（1）按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測定時，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。

（2）計(jì)算式

A樣

含量（%）= ——————————————- ×100%

計(jì)算分光光度法

采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種，使用時均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響，故對照品和供試品測試條件應(yīng)盡可能一致。若測定時不用對照品，如維生素A測定法，則應(yīng)在測定時對儀器作仔細(xì)的校正和檢定。

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